چرا سیگنال ویسکومتر من پیک منفی دارد؟

اگر تا به حال داده های GPC/SEC جمع آوری شده روی ابزار OMNISEC یا TDA 305 خود را که شامل یک آشکارساز ویسکومتر است، تجزیه و تحلیل کرده باشید، ممکن است پیک منفی را مشاهده کرده باشید که مدت ها پس از پیک نمونه در سیگنال ویسکومتر شسته می شود. این اوج طبیعی و مورد انتظار است و اطلاعات زیر امیدواریم به شما در درک دلیل وجود آن کمک کند.

برای شروع، باید اصول اولیه طراحی آشکارساز ویسکومتر را مورد بحث قرار دهیم. آشکارساز ویسکومتر از چهار مویرگ، یک ستون تاخیری و دو مبدل (DP و IP) تشکیل شده است که به روشی که در شکل زیر نشان داده شده است، چیده شده اند.

هنگامی که نمونه وارد ویسکومتر می شود مسیر جریان به دو قسمت تقسیم می شود. نیمی از نمونه از سمت مثبت آشکارساز عبور می کند (نیمه پایینی در این نمودار، به این دلیل نشان داده شده است که با طرف مثبت مبدل DP مطابقت دارد). این بخش مستقیماً از آشکارساز عبور می کند و در نهایت به هدر می رود. نیمه دیگر نمونه که از سمت منفی آشکارساز عبور می کند، در ستون تاخیر نگه داشته می شود. ستون تاخیری به عنوان یک مخزن با حجم زیاد عمل می کند که نمونه را نگه می دارد و آن را از شستشو به تاخیر می اندازد. این اجازه می دهد تا فشار نمونه در محلول در سمت مثبت آشکارساز با فشار حلال مقایسه شود، زیرا نیمی از نمونه در سمت منفی آشکارساز در ستون تاخیر قرار دارد. این منجر به یک پیک مثبت در سیگنال DP می شود، که پیک تحلیلی مورد استفاده برای محاسبه ویسکوزیته ذاتی نمونه (IV) است.

چند میلی لیتر بعد پیک نمونه به حالت اولیه باز می گردد زیرا محلول نمونه کاملاً از سمت مثبت آشکارساز خارج می شود. پس از 10-15 میلی لیتر (بسته به حجم ستون تاخیری)، نیمه باقیمانده نمونه شروع به شستشو از ستون تاخیری می کند. از آنجایی که فشار این محلول نمونه در سمت منفی مبدل DP تنها با حلال در سمت مثبت آشکارساز مقایسه می شود، پیک حاصل معکوس پیک نمونه مثبت است. این اوج گاهی اوقات به عنوان اوج تاخیر، اوج معکوس، یا گاهی اوقات اوج منفی نامیده می شود. اصطلاح اوج تاخیر یا اوج معکوس دقیق تر است. پیک شستشوی بعدی همیشه منفی نیست. پیک تاخیر معمولاً وسیع تر از پیک نمونه است که دلیل آن انتشار نمونه در ستون تاخیر است. نمونه ای از آن در فیلم و شکل زیر نشان داده شده است.

در شکل زیر ، اوج نمونه بین 16-22 میلی لیتر و سپس اوج تأخیر بین 32-42 میلی لیتر به پایان می رسد. از آنجا که اوج نمونه مثبت است ، اوج تأخیر منفی است.

قله های تأخیر برای نمونه ها معمولاً منفی هستند زیرا نمونه ها معمولاً ویسکوزیته محلول را افزایش می دهند و اوج مثبت ایجاد می کنند. با این حال ، نمونه تنها ماده ای نیست که اوج تأخیر ایجاد می کند - حلال انحلال نیز می تواند یکی را ایجاد کند. غالباً ، اوج تأخیر برای حلال انحلال مشاهده نمی شود زیرا حلال انحلال همان مرحله موبایل است. با این حال ، هنگامی که حلال انحلال ویسکوزیته متفاوتی نسبت به فاز موبایل دارد ، "نمونه" خود را ایجاد می کند و اوج تأخیر می کند. این می تواند زمانی اتفاق بیفتد که یک نمونه در یک فاز متحرک حاوی نمک تجزیه و تحلیل شود اما در حلال خالص و بدون نمک حل می شود. پروتئین ها و سایر مواد بیولوژیکی حل شده در آب خالص و تجزیه و تحلیل در بافر فسفات یا سایر محلول های نمکی رایج ترین نمونه این وضعیت هستند. هنگامی که حلال انحلال آب خالص از طرف مثبت ردیاب ویسکومتر عبور می کند ، اوج منفی ایجاد می کند زیرا آب خالص چسبناک تر است و در نتیجه فشار کمتری نسبت به فاز آبی متحرک حاوی نمک ایجاد می کند. از آنجا که اوج "نمونه" برای آب منفی است ، اوج تأخیر مربوطه مثبت است. این اوج تأخیر می تواند باعث سردرگمی شود زیرا مثبت است ، اما واقعاً ، این معکوس اوج منفی ویسومتر است. نمونه ای از این موارد در زیر نشان داده شده است.

اوج نمونه مثبت از 5-6 میلی لیتر اوج تأخیر وسیع و منفی در حدود 22-24 میلی لیتر ایجاد می کند. آب مورد استفاده به عنوان یک حلال انحلال ، اوج ویسکومتر منفی را در فاز متحرک بافر فسفات ایجاد می کند و بین 7-8 میلی لیتر شسته می شود. اوج تأخیر در نتیجه برای اوج آب منفی ، اوج تأخیر گسترده و مثبت در 24-28 میلی لیتر است.

به طور معمول ، زمان اجرای نمونه به گونه ای تنظیم شده است که تمام قله های تأخیر قبل از حرکت روی تزریق بعدی ، شستشو را تمام کرده اند. این تضمین می کند که اوج تأخیر از نمونه قبلی با اوج نمونه از تزریق بعدی تداخل نمی کند.

امیدوارم که این به شما کمک کرده است ، به عنوان یک کاربر ، بهتر درک کنید که چگونه ردیاب ویسکومتر کار می کند و بینشی در مورد اینکه چرا داده های GPC/SEC شما به روشی که انجام می دهد ، ارائه می دهد.